F-キット D-3-ヒドロキシ酪酸

比色法

液卵、卵製品などの食品、生体試料（血液など）中のD-3-ヒドロキシ酪酸の測定。

分析物

D-3-ヒドロキシ酪酸は血液と、ほとんどの動物器官で見られます。未処置の糖尿病では尿中に排泄されます。

卵中のD-3-ヒドロキシ酪酸量の増加で鶏が受精した6日後に検出できます。この増加は胚が死んだ後でさえも続きます。それゆえD-3-ヒドロキシ酪酸は、卵の受精とふ化の特徴的な指示となります。

原理（1）

特異性

本法はD-3-ヒドロキシ酪酸に特異的です。

感度と測定限界

測定感度は試料量（v）が2.000mlの時の0.005吸光度に基づいています。これは0.04mg/l（試料溶液）のD-3-ヒドロキシ酪酸濃度に相当します。

0.2mg/lの測定限界は、最大試料量（v）が2.000mlの時の吸光度変化量0.020に由来します。

直線性

測定の直線性は0.4μg D-3-ヒドロキシ酪酸/アッセイ（0.2mg D-3-ヒドロキシ酪酸/l試料溶液：v=2.000mlから12μg D-3-ヒドロキシ酪酸/アッセイ（0.12g D-3-ヒドロキシ酪酸/l試料溶液：v=0.100ml）の間にあります。

正確性

一つの試料を二重測定した場合、0.005から0.010の吸光度の違いが起きます。標準偏差値は測定範囲内で約1～3％です。

全卵粉の分析:

x=4mg/kg r=3.0mg/kg S(r)=±1.1mg/kg
r=4.1mg/kg S(R)=±1.5mg/kg

干渉物/誤差の原因

試料中の高濃度の還元物質（L-アスコルビン酸、亜硫酸など）は、開始酵素（HBDH)の添加の前にクリープ反応を引き起こします。

キット内容

1. リン酸カリウム/トリエタノールアミンバッファー pH8.6
2. 3×約4Uジアフォラーゼ.約28mg NAD
3. INT
4. 約27U HBDH

試料調製の一般的情報

• 透明で、無色の実際的に中性の液体試料を直接、あるいは希釈後液量2.000mlまで使用してください。
• 濁った溶液はろ過してください。
• 二酸化炭素を含む試料は脱気（ろ過などで）してください。
• 酸性試料はNaOHやKOHでpHを約8に調整してください。
• 固形、半固形試料は砕くか、ホモジナイズし、水で抽出するか溶解してください。
• 蛋白質を含む試料は過塩素酸あるいはCarrez試薬で除蛋白してください。
• 脂肪を含む試料は温水で抽出してください。

参考文献

1. Bergmeyer, H.U. & Bernt, E. (1965) Enzymatische Bestimmung von Keton-Körpern im Blut, Enzymol. Biol.Clin. 5, 65-76.
2. Amtliche Sammlung von Untersuchungsverfahren nach §35 LMBG; Untersuchung von Lebensmitteln: Bestimmung von L-Milchsäure, Bernsteinsäure und D-3-Hydroxybuttersäure in Ei und Eiprodukten (L 05.00-2/ November 1987)
3. Council Directive of 20. June 1989 on hygiene and health problems affecting the production and the placing on the market of egg products (89/437/EEC), Official Journal No. L 212, 22/07/89 p. 0087
4. Parry, A.E.J., Robinson, D.S. & Wedzicka, B.L. (1980) An enzymic assay for β-hydroxy-butyric acid in liquid whole egg, J.Sci.Food Agric. 31, 905-910