F-キット D-イソクエン酸

UV テスト

フルーツジュース、果汁飲料、その他果物製品などの食品並びに生体試料（尿など）中のD-イソクエン酸の測定。

分析物

D-イソクエン酸はクエン酸回路の一部であり、全ての動物、植物に存在します。その量は通常低いものです。

D-イソクエン酸の測定は、フルーツジュースにおいて不法な添加剤（混ぜ物）の検出にその重要性が増してきています。

原理（1）

特異性

本法はD-イソクエン酸に特異的です。

感度と測定限界

測定感度は試料量（v）が2.000mlの時の0.005吸光度に基づいています。これは（340nm）で測定したときの0.25mg/l（試料溶液）のD-イソクエン酸濃度に相当します。

1mg/lの測定限界は、最大試科量（v）が2.000mlの時の吸光度変化量0.020に由来します。

直線性

測走の直線性は2μg D-イソクエン酸/アッセイ（1㎎ D-イソクエン/l試料溶液：v=2.000ml）から100μg D-イソクエン酸／アッセイ（1g D-イソクエン酸/l試料溶液：v=0.100ml）の間にあります。

正確性

一つの試料を二重測定した場合、0.005から0.010の吸光度の違いが起きます。標準偏差値は測定範囲内で約1～2％です。

フルーツジュースの分析（5）:

r=2.5mg/l S(r)=±0.8944mg/l
R=4.4mg/l S(R)=±1.5665mg/l

干渉物/誤差の原因

重金属イオンは濁りの原因となり反応に干渉します。高濃度の亜硫酸はクリープ反応を引き起こします。

キット内容

1. イミダゾールバッファー.pH 7.1
2. 約45mg NADP
3. 約5U ICDH

試料調製の一般的情報

• 透明で、無色の実際的に中性の液体試料を直接、あるいは希釈後液量2.000mlまで使用してださい。
• 二酸化炭素を含む試科は脱気（ろ過などで）してください。
• 濁った溶液はろ過してください。
• 酸性試科はNaOHやKOHでpHを約7～7.5に調整してください。
• 弱酸性で軽く色のついた試科はpHを7～7.5に調整し、約15分問インキュべートしてください。
• 色のついた試料は（もし必要ならpHを7～7.5に調整して）、試料ブランクに対して測定してください。
• 強く色のついた試料を希釈せず、多い液量で用いる場合は、ポリビニルポリピロリドン（PVPP)やベントナイトで処理してください。
• 固形、半固形試料は砕くか、ホモジナイズし、水で抽出するか溶解してください。
• 脂肪を含む試料は温水で抽出してください。

参考文献

1. Siebert, F. (1974) in Methods of Enzymatic Analysis (Bergmeyer, H.U., ed.) 2nd ed., vol. 3, pp. 1570-1573, Verlag Chemie, Weinheim/Academic Press Inc., New York and London
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6. Nederlandse Norm NEN 2844, le druk. maart 1984: Vruchtesappen Bepaling van het totale D-isocitronen- zuurgehalte: Enzymatische methode (Fruit Juices - Determination of the total D-isocitric acid content - Enzymatic method)
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8. RSK-Values, The Complete Manual, Guide Values and Ranges of Specific Numbers for Fruit Juices and Nectars, Including the Revised Methods of Analysis (1987), 1st ed., Verlag Flüssiges Obst/Liqiud Fruit, D-56370 Eschborn, pp. 103-106
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10. DIN EN 1 139 Frucht- und Gemüsesäfte, Enzymatische Bestimmung des Gehaltes an D-Isocitronensäure: Spektralphotometrische Bestimmung von NADPH (1994)
11. Europäische Norm/European Standard EN 1139 (Dec. 1994) Fruit and vegetable juices - Enzymatic determination of D-isocitric acid content
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