F-キット ピルビン酸

UV テスト

ミルク、ワイン、チーズなどの食品中のピルビン酸の測定。

原理

酸化されるNADH量は、ピルビン酸量に比例するため、NADHの吸光度（340nm）の減少量を測定します。

測定再現性

本製品を便用した場合、ピルビン酸（0.02～0.5g/l）の反応は、5～6分以内で終了します。
日内再現性（平均±標準偏差）は、以下の通りです。

（社内データ）
日内再現性：
n=10 0.02g/l 0.02±0.0004
n=10 0.5g/l 0.5±0.002

測定範囲

ピルビン酸の測定範囲は、0.02～0.5g/l（試料量0.1mlの場合）、0.001～0.025g/l（試料量2.0mlの場合）です。

1キュベット当たりのピルビン酸量は2～50μgとなるように希釈して測定を行って下さい。

反応特異性

L-乳酸脱水素酵素は、pyruvate、β-hydroxypyruvateおよびg1yoxalateと同程度に、2-oxobutyrateおよび2-oxovalerateと比較的緩やかに反応します。

pyruvate以外のこれらの酸が試料中に存在している場合は、外挿法で測定することができます。

キット内容

1. L-乳酸脱水素酵素約120U 1本
2. NADH（16mg） 5ml 4本
3. 緩衝液(Tris-HCl)、 pH7.6 1本

試料の調製方法

1．液状の食品

• 濁っている溶液を測定試料にする場合、溶液をろ過して下さい。
• ピルビン酸濃度は、0.5g/l以下になるようにイオン交換水又は蒸留水で希釈します。
• 希釈した溶液がわずかに着色していても測定可能です。
• 測定試料溶液のpHは、7.0～7.6に調整して下さい。

2．固体および半固体の食品

• 試料をホモジナイズ後、イオン交換水又は蒸留水で溶解するか、抽出して下さい。
  濁りがある場合はろ過して下さい。
• 脂肪を含む試料は、温水で抽出した後、冷却して脂肪分を分離して下さい。
• 蛋白質を含む試料は、除蛋白して蛋白成分を分離して下さい。
  除蛋白は過塩素酸溶液を用いて下さい。
• 溶液状にした試料は、ピルビン酸濃度が0.5g/l以下になるようにイオン交換水又は蒸留水で希釈します。
  希釈した溶液がわずかに着色していても測定可能です。
• 測定試料溶液のpHは、7.0～7.6に調整して下さい。

参考文献

1. pp. 116-118 in "Methods of Biochemical Analysis and Food Analysis, using Single Reagents" (1989), BOEHRINGER MANNHEIM GMBH, Biochemica
2. Czok, R. & Lamprecht. W (1974) in Method of Enzymatic Analysis (Bergmeyer, H.U., ed) vol.3, pp.1446-1451: Verlag Chemie, Weinheim/Academic Press.inc.,New York & London
3. Lamprecht, W & Heinz, F. (1984) in Method of Enzymatic Analysis (Bergmeyer, H.U.,ed) 3rd ed., vol.VI, pp.570-577, Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach/Florida, Basel
4. Grassl, M. & Supp, M. (1985) in Method of Enzymatic Analysis (Bergmeyer, H.U.,ed) 3rd ed.,vol.VII,pp.345- 349, Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach/Florida, Basel